GB.18-食品安全国家标准
蔬菜中非草隆等15种取代脲类除草剂残留量的测定
液相色谱法
前言
本标准代替NY/T-《蔬菜中非草隆等15种取代脲类除草剂残留量的测定液相色谱法》。
本标准与NY/T-相比主要修改如下：
——对标准名称进行了修改，增加了食品安全国家标准部分；
——根据食品安全标准的格式进行了修改。
——规范性引用文件中增加GB《食品中农药最大残留限量》标准；
——在试样制备中增加了取样部位的规定及细化了试样制备的要求；
——增加了精密度要求。
1范围
本标准规定了蔬菜中非草隆、丁噻隆、甲氧隆、灭草隆、绿麦隆、氟草隆、异丙隆、敌草隆、绿谷隆、溴谷隆、炔草隆、环草隆、利谷隆、氯溴隆、草不隆等15种取代脲类除草剂残留量液相色谱法测定方法。
本标准适用于蔬菜中上述15种取代脲类除草剂残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
GB/T分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经乙腈匀浆提取，提取液经盐析，过弗罗里硅土固相萃取柱净化，样品经浓缩后，进液相色谱，经C18分离后，样品过光解反应器分解成伯胺，与OPA反应生成荧光物质，在激发波长nm，发射波长nm处测定，根据保留时间定性、外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用色谱纯的试剂，水为GB/T规定的一级水。
4.1试剂
4.1.1乙腈（CH3CN）。
4.1.2甲醇(CH3OH)。
4.1.3丙酮(C2H6CO)。
4.1.4正己烷(C6H14)。
4.1.5异丙醇(C3H8OH)。
4.1.6氯化钠(NaCl，分析纯)：℃烘烤4h，在干燥器内冷却至室温，贮于干燥器中备用。
4.2溶液配制
4.2.1四硼酸钠溶液（4.0g/L）：称取7.5g四硼酸钠[Na2B4O7·10H2O]，用水溶解并稀释至mL。
4.2.2邻苯二甲醛的甲醇溶液（10g/L）：称取1.0g邻苯二甲醛[C8H6O2]，用甲醇溶解并稀释至mL。
4.2.3巯基乙醇溶液（g/L）：称取20.0g巯基乙醇[(CH3)2N(CH2)2SH·HCl]，用四硼酸钠溶液溶解稀释至mL。
4.2.4柱后衍生试剂：吸取5mL邻苯二甲醛溶液和5mL巯基乙醇溶液，加入到mL四硼酸钠溶液中。
4.3标准品
15种农药标准品，纯度≥95%。
4.4标准溶液配制
4.4.1单一农药标准溶液：分别准确称取各农药标准品，用异丙醇溶解稀释，逐一配成mg/L的单一农药标准储备溶液，-18℃以下贮存。使用时根据各农药的响应值，吸取适量的标准储备液，用乙腈稀释配制成所需的标准工作溶液。
4.4.2混合农药标准溶液：根据各农药的响应值，逐一吸取一定体积的各农药标准储备液分别注入同一容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成农药混合标准储备溶液。使用前用乙腈稀释成所需的标准工作液。混合标准工作溶液质量浓度参见附录A。
4.5材料
弗罗里硅土固相萃取小柱：填充物mg，容积6mL。
5仪器
5.1液相色谱仪：附荧光检测器。
5.2带紫外光解的柱后衍生装置，紫外灯，波长nm，4W；光解反应管，长度3m，管内径0.5mm。连接示意图见附录B。
5.3高速匀浆机，转速大于0r/min。
5.4氮吹仪。
6分析步骤
6.1试样的制备
将蔬菜样品取样部位按GB-附录A规定取样，对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段或处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯瓶中于-16℃~-20℃条件下保存。
6.2提取
称取25g试样（精确到0.01g）于mL锥形烧瓶中，加入50.0mL乙腈，用高速匀浆机0r/min匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g~7g氯化钠的mL具塞量筒中，收集滤液30mL~40mL，盖上盖子，剧烈震荡1min，静置20min，使乙腈相和水相分层。
6.3净化
吸取上述上层提取液10mL于20mL离心管中，于50℃用氮气缓慢吹干后，加入2.0mL正己烷溶解残渣。将弗罗里硅土柱依次用5mL丙酮-正己烷溶液（4+6），5mL正己烷预淋洗条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入样品溶液，用15mL离心管收集洗脱液，用5mL丙酮-正己烷溶液（4+6）洗20mL离心管后过弗罗里硅土柱，并重复一次。将15mL离心管置于50℃水浴中，用氮气缓慢吹干后，加入2.5mL乙腈振荡溶解残渣，再加入2.5mL水，振摇后，过0.22μm滤膜，待测。
6.4色谱参考条件
色谱柱：C18柱，5.0μm，mm×4.6mm，或相当者。
柱温：25℃。
荧光检测器：λexnm，λemnm。
进样量：20μL。
流速：0.75mL/min。
流动相梯度：见表1。
柱后衍生试剂，流速0.2mL/min。
光解温度：室温。
衍生温度：室温。
6.5测定
按照仪器条件，对标准工作溶液和试样溶液等体积交替进样，根据保留时间定性，外标法定量。同时做试剂空白。
7结果计算
样品中被测农药残留量以质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式(1)计算：
式中：
c——标准溶液中各农药的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
A1——样品测定液中各农药的峰面积；
A2——标准溶液中各农药的峰面积；
V——样品定容体积，单位为毫升（mL）；
V1——样品提取液的体积，单位为毫升（mL）；
V2——分取乙腈提取液的体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字，含量超1mg/kg时表示到三位有效数字。
8精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录C的要求。
在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。
9定量限
本标准方法参见附录A。
10色谱图
15种取代脲类除草剂标准物质色谱图见图.1。
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