DNA甲基化是在DNA甲基化转移酶的作用下将甲基选择性地添加到胞嘧啶上形成5-甲基化胞嘧啶的过程，是表观遗传学的重要组成部分。
DNA甲基化被调控的三阶段：甲基化的建立（Denovo）、甲基化的维持和脱甲基
在动物中，从头甲基化往往出现在转座子区域和印记区域；而在植物中的从头甲基化主要发生在转座子区域和重复区域。甲基化的第二阶段就是甲基化的维持：部分的甲基化位点可以在细胞增殖中，在甲基化酶的作用下，从复制后的半甲基化序列变成全甲基化序列。
第三阶段就是甲基化的去除：被动去甲基化可能是由于维持机制的缺乏，甲基化酶的功能障碍等使总甲基化水平降低；主动去甲基化就是介导5mC迭代氧化，最后被识别成不正常的碱基，从而被切除。
甲基化在不同研究领域的应用
重亚硫酸盐（Bisulfite）甲基化测序是以新一代高通量测序平台为基础，结合全基因组Bisulfite处理和生物信息数据分析技术，进行低成本、高准确度的全基因组DNA甲基化水平图谱绘制，适用于基因表达调控、表观异质性、胚胎发育、疾病研究、遗传印记、分子育种等多种领域。
WGBS在多组学研究中的角色-农学应用方向
WGBS在多组学研究中的角色-医学应用方向
全基因组甲基化产品介绍
常规全基因组甲基化建库（WGBS）
1.简介：在Bisulfite处理DNA之前需要对DNA进行打断和长度选择，因此WGBS需要的DNA起始量通常在5μg左右。而安诺基因通过不断优化，成功将建库起始量降低到ng，即可获得高质量的WGBS文库。
2.样品物种要求：有染色体水平参考基因组的物种
3.样品需求量：
新鲜动物组织-mg
细胞-个
新鲜植物组织0.5-1g
细菌-个
血液5ml
gDNA≥ng
4.建库实验流程：
ng基因组DNA起始建库，C-T转化根据EZDNAMethylation-Gold?KitDNA甲基化试剂盒（D6）方法及流程进行Bisufile处理，构建WGBS文库。本操作流程主要包括以下几个内容：
WGBS实验原理图
5.优势和劣势
优势：实现单碱基分辨率5mC图谱。
劣势：对于特殊微量样本类型，如临床样本、珍稀样本等，gDNA不足的情况无法建库。
微量全基因组甲基化建库
1.简介：除了常规的WGBS建库，安诺基因也开发了针对微量DNA样本的低起始量全基因组甲基化文库，将建库起始量成功降低到50ng，在分析结果上也与正常样本保持高度结果一致性。
2.样品物种要求：有染色体水平参考基因组的物种
3.样品需求量：gDNA≥50ng
4.建库原理和流程：与常规建库方法相比，微量甲基化建库使用先进行BS处理再进行接头的连接的方法，从而巧妙地避免了普通制备文库过程中，BS剧烈处理下的样本损耗。
常规WGBS建库（左）和微量甲基化建库（右）
全基因组甲基化常见问题
Q1：WGBS对于物种有什么限制或要求？
A：1)是否为低甲基化率的物种：已报道的低甲基化率常见真核物种包括果蝇、面粉甲虫、酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、线虫和黄曲霉等，原核生物基因组的5mC修饰频率也普遍很低。
2)该物种参考基因组组装情况如何：参考基因组组装未达染色体水平，会明显影响的比对效果，分析结果也会不理想。
3)基因组是否存在复杂因素：GC含量偏高、杂合度偏高、转座子多、重复区域多等因素都会影响比对效果，导致最终结果不理想.
Q2：Bisulfite处理后C-T转化率正常范围是多少？
A：目前我们的实验流程很成熟，Bisulfite处理后非甲基化C的C-T转化率在99%以上，多数时候在99.5%以上，确保Bisulfite对DNA的处理达到生物信息分析要求。用叶绿体DNA或其他样本中未甲基化DNA作为标准，计算得到的转化率可能与利用λDNA计算的结果有极小的出入。这些方法都有文章使用，客户可以根据需求进行选择。
近年来，DNA甲基化的研究逐渐成为新的研究热点。随着对甲基化研究的深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。因此，探讨甲基化形成与改变的可能机制，建立准确性高，灵敏度高，操作简单的DNA甲基化检测方法，对探讨甲基化调控规律，提高哺乳动物体细胞核移植效率、揭示杂种优势的表观遗传学基础意义重大。
转载请注明地址:http://www.abmjc.com/zcmbyf/5900.html
