高效液相色谱仪测定食品中苏丹红染料的含量

1、范围

本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。

本标准规定了食品中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的高效液相色谱仪测定方法。

方法最低检测限：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为10ug/kg。

2、术语和定义

苏丹红：属偶氮系列化工合成染料。

3、方法要点

样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱仪—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。

4、试剂与标准品

4.1乙腈色谱纯

4.2丙酮色谱纯、分析纯

4.3甲酸分析纯

4.4乙醚分析纯

4.5正己烷分析纯

4.6无水硫酸钠分析纯

4.7层析柱管：1cm（内径）×5cm(高)的注射器管。

4.8层析用氧化铝（中性目～目）：℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每g中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。

4.9氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。

4.%丙酮的正己烷液：吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。

4.11标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%

4.12标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至mL。

5、仪器与设备

5.1高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）

5.2分析天平：感量0.1mg

5.3旋转蒸发仪

5.4均质机

5.5离心机

5.60.45μm有机滤膜

6、样品制备

将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。

7、操作方法

7.1样品处理

7.1.1红辣椒粉等粉状样品

称取1g～5g（准确至0.g）样品于三角瓶中，加入10mL～30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液。

用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。

控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL～30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷60mL洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45μm有机滤膜过滤后待测。

7.1.2红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品

称取0.5g～2g（准确至0.g）样品于小烧杯中，加入适量正己烷溶解（约1mL～10mL），难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。

7.1.3辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品

称取10g～20g（准确至0.01g）样品于离心管中，加10mL～20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL正己烷：丙酮=3：1，匀浆5min,rpm离心10min,吸出正己烷层，于下层再加入20mL×2次正己烷匀浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作。

7.1.4香肠等肉制品

称取粉碎样品10g～20g（准确至0.01g）于三角瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆5min，滤出清液，再以20mL×2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按7.1.1中“慢慢加入到氧化铝层析柱中过滤后待测”操作。

7.2推荐色谱条件

7.2.1仪器条件

色谱柱：C.5μm4.6mm×mm

流动相：

A：0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85：15

B：0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20

梯度洗脱：

流速:1mL/min

柱温：30℃

检测波长：苏丹红Ⅰnm；苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳnm；于苏丹红Ⅰ出峰后切换。

进样量10μl。

7.2.2标准曲线

吸取标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL，用正己烷定容至25mL，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56μg/mL,绘制标准曲线。

7.3计算

按公式（1）计算苏丹红含量

R=C×V/M······（1）

R—样品中苏丹红含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

C—由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；

V—样液定容体积，单位为毫升（mL）；

M—样品质量，单位为克（g）