革兰氏染色法
一，方法原理：
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。
革兰氏染色法是年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
二，使用器材
菌株：培养12-16h的苏云金杆菌（Bacillusthuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillussubtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichiacoli）
染色液和试剂：结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红、复红、二甲苯、香柏油
器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜
三，革兰氏染色方法步骤：
1、以酒精擦拭玻片，在酒精灯上干燥后，用接种环挑取一环灭菌的去离子水或生理盐水到载玻片上，挑取少量纯培养物在水滴上涂抺至均匀分散，将涂片在酒精灯火焰上灭活、固定。
2、滴加结晶紫染色液1-2滴，染1分钟，用去离子水轻轻水洗。
3、待干，滴加革兰氏碘液，作用1分钟，用去离子水轻轻水洗。
4、滴洗脱色剂（95%酒精），不时摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约10～20秒），用去离子水轻轻水洗。
5、待干，滴加沙黄复染液，复染30秒。用去离子轻轻水洗，待玻片干燥后镜检。
6、油镜镜检。菌体呈紫色者为革兰氏阳性菌；呈红色者为革兰氏阴性菌。
四，相
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