本文介绍了胡萝卜素检测的一般方法,简单快速,当然对于数据精度要求比较高的人还是推荐高效液相色谱法。
原理-胡萝卜素含量测定-上海液质:
胡萝卜素不溶于水而溶于有机溶剂,经过粉碎的样品可用有机溶剂提取,置于活性MgO与硅藻土助滤剂层析柱上分离,用丙酮-己烷液洗脱后在nm处测定吸光度,求出其含量。
仪器设备
试剂-胡萝卜素含量测定-上海液质
(1).丙酮(2).己烷(须加入NaOH重蒸馏)(3).吸附剂:活性MgO(4).助滤剂:硅藻土(5).洗脱液:丙酮-己烷(1:9)(6).MgCO3试剂(7).无水Na2SO4试剂
方法步骤-胡萝卜素含量测定-上海液质:
(1).样品提取:将叶片切碎后称取25g置于高速组织匀浆器中,加入40mL丙酮、60mL己烷、0.1gMgCO3,匀浆5min,然后真空过滤或静止澄清。将上清液转入分液漏斗中,样品残渣用2份25mL丙酮,1份25mL己烷进行洗涤,洗涤液并入提取液中。用5份mL的水洗涤提取液以洗去其中的丙酮,弃去水。将上层己烷液转入mL容量瓶中,加入9mL丙酮,再用己烷稀释到刻度。在这里也可用无水乙醇代替丙酮,用80mL乙醇及60mL己烷提取样品。(2).层析分离:将活性MgO与硅藻土助滤剂按1:1混合均匀,装入层析柱管中,管底先装一些玻璃棉,然后松散地装15cm高的混合吸附剂,将其置于真空装置上抽真空致紧,压平柱顶吸附剂表面。吸附剂装柱10cm高,在吸附剂表面上再装一层无水Na2SO4.将层析柱与真空泵相连,加入样品的提取液到顶部,用50mL丙酮-己烷洗脱液进行洗脱,将有色的胡箩卜素从柱上洗脱。整个操作过程中应保持柱顶面上有一层溶液。收集胡萝卜素的洗脱液(胡萝卜素首先被洗脱下来,叶黄素、胡萝卜素的氧化产物及叶绿素等被吸附停留在柱中)。收集的洗脱液用真空蒸发器除去溶剂,用丙酮-己烷液溶解残渣,移入mL容量瓶中,并稀释至刻度,供分光光度计测定。(3).测定:用1cm比色杯,以丙酮-己烷液为空白对照液调节分光光度计零点,在nm波长处测定上述待测液的吸光率。(4)结果计算:
式中,A:测得的吸光度;5.1:胡萝卜素的消光系数(μg/mL);FW:1mL测定样品液中的样品含量(g/mL)。
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