单宁是一种苦味和涩味的化合物，在自然界中大量存在。它们存在于植物的木材，树皮，叶子和果实中，如橡木，大黄，茶，核桃，蔓越莓，可可和葡萄。其有以下特点：无臭，微有特殊气味，味极涩。溶于水及乙醇，易溶于甘油，几乎不溶于乙醚、氯仿或苯。其水溶液与铁盐溶液相遇变蓝黑色，加亚硫酸钠可延缓变色。
今天就和大家聊聊如何通过比色法测定单宁：一、实验原理用二甲基甲酰胺溶液振荡提取植物中单宁，过滤后取滤液，在氨存在的条件下，与柠檬酸铁铵形成一种棕色络合物，用分光光度计在nm波长处测定其吸光度值，与标准系列比较定量。二、试剂所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水①单宁酸标准液：0.3mg/mL，低温避光保存。单宁酸标准来源不同，对测试结果有影响，因此，推荐使用分子量为.25的单宁酸作为标准品，并且配制的标准溶液测得吸光度值应在0.45~0.55范围之内。②8g/L氨溶液：取浓氨水（25%~28%）3.6mL，定容至mL。③75%（V/V）二甲基甲酰胺溶液：取75mL二甲基甲酰胺，加水约20mL，混匀，放置室温，然后定容至mL。（注意此药品对肺、皮肤和眼睛有伤害）④3.5g/L柠檬酸铁铵溶液：使用前24h配制。三、主要仪器万分之一分析天平、UV-PC紫外可见分光光度计四、试样的制备样品弃去杂质，用机械粉碎机粉碎，并全部通过1.0mm孔径的筛子，充分混匀。五、分析步骤5.1试样溶液制备称取试样约1.0g，精确至0.g至于mL三角瓶中，准确加入50mL75%二甲基甲酰胺溶液，加塞子密封，于振荡机上振荡60min，然后用双层滤纸过滤，滤液备用。5.2标准曲线绘制测定试验当天，按以下步骤绘制标准曲线。用75%二甲基甲酰胺溶液配置标准溶液系列分别相当于0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/mL的单宁酸。吸取以上单宁酸标准溶液系列1.0mL，置于6只试管中，准确加入5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液，振荡混匀，再各加1.0mL氨溶液，充分振荡混匀，静置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度计在nm波长处测定吸光度值。以吸光度值作为纵坐标，以单宁酸标准溶液系列中单宁酸含量（mg/mL）作横坐标，绘制标准曲线。5.3样品测定取上述滤液1.0mL，置于试管中，加6.0mL水和1.0mL氨溶液，振荡混匀、静置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度计在nm波长处测定吸光度值。取上述滤液1.0mL，置于试管中，加5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液，振荡混匀，再加1.0mL氨溶液，充分振荡混匀、静置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度计在nm波长处测定吸光度值。结果为两次测定吸光度值之差。六、结果计算单宁含量以干基中单宁酸质量的百分数来表示，按下式计算：式中：C—从标准曲线上查得相当的单宁酸含量，ug；M—试样质量，g；Vt—提取总体积，ml；Vc—测量液体积，ml。来源：成都栢晖生物整理转载请注明地址:http://www.abmjc.com/zcmbyf/6342.html
