哈喽!各位童鞋们大家好,今天带来的是MALDI-TOF的介绍~

很多童鞋可能都知道质谱分析的第—步是要把待分析物质离子化,那么对于蛋白质、多肽等大分子物质,—些离子源,如电喷雾电离(ESI)和大气压化学电离(APCI)等在电离过程中会使大分子离子发生碎裂,形成碎片。那有没有什么设备可以做到:让这些大分子能够变成气态离子的状态,而不碎裂或者分解?

而MALDI-TOF的出现解决了这个难题。

它通过引用基质分子,不产生或产生较少的碎片离子。它温和的离子化条件使它能够很好的测定蛋白质、多肽、生物多聚体和DNA等大分子物质。MALD1-TOF是通过引入基质的方式来离子化待测物分子,最常见的MALDl离子化形式是被测物分子带—个正电荷,气态的被测物离子产生后,它们的质量就通过飞行时间质谱进行分析。

那么问题来了,飞行时间质谱是通过什么方法来将离子进行分离并确定每个离子的质荷比呢?

MALDI-TOF质谱是一种全面分析技术,可以用来检测、鉴别和定量生物大分子和有机大分子化合物,MALDI是“基质辅助激光解析离子化”的英文缩写,这种离子化方法使用激光打击在有机小分子的基质上,让基质中的脆弱有机大分子能够变成气态离子的状态,而不碎裂或者分解。TOF代表飞行时间质谱,它通过质荷比将离子进行分离,并根据离子到达检测器花费的时间来确定该离子的质荷比。

接下来让我们详细看看MALDI-TOF质谱的主要部件,像其他质谱一样,MALDI-TOF第一步就是待分析物分子的离子化,这里的待分析物指是将被测定的分子或者混合物,MALDI多才多艺,基本上只要你能在被分析物上放一个电荷上去,什么都可以做。能分析很小的物质,可以分析酯类,可以分析蛋白。

它的应用范围真的很广,MALDI-TOF最适合的是分析生物大分子,如肽类、脂类、核酸、糖类和其他有机大分子。(因为他们很大,在受热的时候容易分解)

还有组织切片分析等。对于一些非挥发性和热不稳定性的化合物也是一种很好的选择。应用领域:广泛应用于材料、化工、生物、医药、石油化工、生命科学和临床医学等领域。

传统的离子化方式,如电子轰击,就容易让大分子碎裂或者损毁,MALDI-TOF被认为是一种“软”电离的方式。能够电离整个待测物的分子,MALDI离子化最关键的步骤就是基质的使用,基质是一些用来辅助离子化过程的小分子化合物,常见的有CHCA、DHB和SA,所有基质分子的共同点就是共轭π体系,比如苯环和上面的官能团。它们能够吸收紫外光的能量,并将大分子消蚀变成气体状态。

气态的被测物离子产生后,它们的质量就通过飞行时间质谱进行分析,飞行时间质谱将气态离子用高压电场进行加速,这个电场将恒定的动能传递给离子,TOF检测器会记录这些离子运动一段固定距离所需要的时间。根据时间质谱就可以计算和记录每个离子的质荷比,因为MALDI离子化经常产生单电荷的离子,质谱图上就能直接表示出检测到的离子的质量数,每个峰高跟检测到的离子数量成正比,MALDI比如电子轰击,具有很多优势,整个分子在离子化的过程中都能够保持完整,更加激烈的电离方式会导致分子碎裂,软电离可以让混合样品的直接质谱分析成为可能。

MALDI-TOF样品要求:

样品状态:可为粉末、液体样品,样品尽量不要含有盐。

粉末样品:细细的粉末5-10mg,在合适的溶剂中溶解性可以或者分散,常用溶剂为CDCl3甲苯、丙酮、甲醇、乙腈、三氟乙酸、水、乙酸乙酯、乙醚、THF

液体样品:2mL,需要备注液体样品的具体浓度(一般要求不低于1mg/mL),以及缓冲液的成分(一般建议Tris,碳酸氢铵,浓度在20mM以下属于盐类,易电离,多的话干扰结果)

以上就关于MALDI-TOF的全面介绍啦~



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