一、目的要求
了解1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）在乙烯生物合成过程中的作用，学习果蔬组织中ACC含量的测定方法。
二、基本原理
ACC可被NaOCl的碱性溶液氧化产生乙烯。乙烯在常温下是气体物质，可直接用气相色谱法测定，然后根据ACC向乙烯转化的效率，就可计算出果蔬组织中ACC的含量。
三、材料、仪器及试剂
（一）材料
梨、苹果、番茄等。
（二）仪器及用具
研钵、高速冷冻离心机、移液器、水浴锅、旋涡混合仪、旋转蒸发仪、样品瓶（20mL，带有密封橡胶塞）、离心管、试管（25mL）、气相色谱仪。
（三）试剂
1．95%、80%乙醇溶液
2．25mmol/LHgCl2溶液
称取67.88mgHgCl2，用蒸馏水溶解、稀释至10mL。
3．5%NaClO-饱和NaOH（NaClO:NaOH=2:1，v/v）混合液
4．1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）
四、实验步骤
（一）ACC的提取与制备
称取5.0g果蔬样品，置于研钵中，稍加研磨后，转入到试管中，加入10mL95%乙醇溶液，煮沸浸提20min，冷却后于×g离心15min，收集上清液。再向残渣中加入10mL80%乙醇于70℃浸提30min，离心，收集上清液。合并两次浸提液，用旋转蒸发仪在40℃条件下将浸提液蒸发至干。向蒸发残留物中加入2.0mL蒸馏水振荡溶解，即为ACC制备液，于-20℃保存备用。
（二）ACC含量的测定
取1.0mLACC制备液，置于容积为20mL的样品瓶中，加入40μL25mmol/LHgCl2溶液，用橡胶塞密封样品瓶，冰浴10min使温度平衡。再通过注射加入0.2mL经冰浴预冷的5%NaClO-饱和NaOH（NaClO:NaOH=2:1，v/v）混合液，迅速振荡5s后，放回冰浴平衡5min，顶空取1.0mL气体，用气相色谱法测定乙烯生成量。
（三）ACC转化率的计算
取同一处理果蔬样品ACC提取液两份，其中一份加入20μL0.1mmol/LACC标准品作为内标物，按照前面叙述的方法进行测定。两份样品乙烯生成量之差即为所添加的ACC转化为乙烯的量。此外，根据所添加ACC的量，计算出理论上能够形成的乙烯的两，就可以计算出该处理的ACC转化率（R），重复三次。计算公式：
五、实验结果与计算
1．将测定的数据填入下表
2．计算结果
根据气相色谱法测得顶空气体中乙烯含量，计算每克鲜重果蔬样品中ACC的含量，以nmol/gFW表示。计算公式：
式中：
C——气谱法测得顶空气体中乙烯含量，μl/L；
VL——样品瓶剩余空间体积，mL；
V——样品提取液总体积，mL；
R——ACC向乙烯转变的效率，%；
Vs——测定时所取样品提取液体积，mL；
W——样品重量，g；
22.4——标准状况下1摩尔气体体积常数，L/mol。
六、注意事项
1．果蔬组织含水量较高，因此在提取ACC时所用的乙醇的浓度较高。
2．某些果蔬果肉组织色素含量很多，需要进行去除色素的操作。可向蒸发残留物中加入1mL氯仿，振荡2分钟以溶解色素。再加入2.0mL蒸馏水振荡2min，于4℃过夜再经rpm离心10min分相，弃去氯仿层，水相即为ACC制备液。
3．按照前面的方法测定的是游离的ACC含量。实际上，利用ACC制备液还可测定结合态的ACC（即MACC）含量。取1.0mLACC制备液，加入0.2mL12mol/LHCl，于沸水浴中加热3h。冷却后加入1.2mL2mol/LNaOH中和。然后，按照测定ACC的方法进行测定，即得总的ACC含量。MACC含量为总ACC含量减去游离ACC含量。
4．氯化汞，别名升汞，分子式HgCl2，分子量.52。为无色或白色结晶及颗粒粉末，剧毒。溶于水、醇、醚、丙酮和甲醇，水溶液呈酸性。常温时微量蒸发，遇光逐渐分解生成氯化亚汞。汞离子可使含巯基的酶丧失活性，失去功能，还能与酶分子中的氨基、二巯基、羧基、羟基以及细胞内的磷酰基结合，引起相应的损害，因此要小心使用。
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