一、原理
试样用乙腈提取,提取液经固相萃取或分散固相萃取净化,使用带火焰光度检测器的气相色谱仪检测,根据双柱色谱峰的保留时间定性,外标法定量。
二、试剂与材料
除非另有说明,在分析中仅使用分析纯的试剂,水为GB/T６６８２规定的一级水.
2.1 试剂
2.1.1乙腈：色谱纯。
2.1.2 丙酮：色谱纯。
2.1.3 甲苯：色谱纯。
2.1.4无水硫酸镁。
2.1.5氯化钠。
2.1.6乙酸钠。
2.2溶液配制：乙腈-甲苯溶液(３＋１,体积比):量取mL甲苯加入mL乙腈中,混匀。
2.3标准品：90种有机磷类农药及其代谢物标准品：纯度≥９６％。
2.4标准溶液配制：
2.4.1标准储备溶液(0mg/L)：准确称取10mg(精确至0.1mg)有机磷类农药及其代谢物各标准品,用丙酮溶解并分别定容到10mL.标准储备溶液避光且低于-18℃保存,有效期一年。
2.4.2混合标准溶液：将90种有机磷类农药及其代谢物分成6个组,分别准确吸取一定量的单个农药储备溶液于50mL容量瓶中,用丙酮定容至刻度.混合标准溶液,避光０℃~４℃保存,有效期一个月。
2.5材料：
2.5.1固相萃取柱：石墨化炭黑填料(GCB)mg/氨基填料(NH2)mg,６mL。
2.5.2乙二胺--丙基硅烷硅胶(PSA）：40um~60μm。
2.5.3十八烷基甲硅烷改性硅胶(C18)：:40μm~60μm。
2.5.4陶瓷均质子：２cm(长)×１cm(外径)。
2.5.5微孔滤膜(有机相)：0.22μm×25mm。
三、仪器和设备
3.1 气相色谱仪:配有双火焰光度检测器(FPD磷滤光片)。
3.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g。
3.3 高速匀浆机:转速不低于10r/min。
3.4 离心机:转速不低于r/min。
3.5 组织捣碎机。
3.6 旋转蒸发仪。
3.7 氮吹仪,可控温。
3.8 涡旋振荡器。
四、试样制备
4.1 试样制备
蔬菜和水果的取样量按照相关标准规定执行,食用菌样品随机取样１kg.样品取样部位按GB的规定执行.对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀样品,可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品,可在不同部位切取小片或截成小段后处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆,放入聚乙烯瓶中。
取谷类样品g,粉碎后使其全部可通过μm的标准网筛,放入聚乙烯瓶或袋中.取油料作物、茶叶、坚果和调味料各g,粉碎后充分混匀,放入聚乙烯瓶或袋中。
植物油类搅拌均匀,放入聚乙烯瓶中。
五、分析步骤
5.１ 提取和净化
5.1.１ 蔬菜、水果和食用菌
称取20g(精确到0.01g)试样于mL烧杯中,加入40mL乙腈,用高速匀浆机10r/min匀浆２min,提取液过滤至装有５g~７g氯化钠的mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡１min,在室温下静置30min。
准确吸取10mL上清液于mL烧杯中,80℃水浴中氮吹蒸发近干,加入２mL丙酮溶解残余物,盖上铝箔,备用。
将上述备用液完全转移至15mL刻度离心管中,再用约3mL丙酮分3次冲洗烧杯,并转移至离心管,最后定容至5.0mL,涡旋0.5min,用微孔滤膜过滤,待测。
5.1.２ 油料作物和坚果
称取10g(精确到0.01g)试样于mL烧杯中,加入20mL水,混匀后,静置30min,再加入50mL乙腈,用高速匀浆机10r/min匀浆2min,提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静置30min。
准确吸取8mL上清液于15mL刻度离心管中,加入mg无水硫酸镁、mgPSA、mgC18,涡旋0.５min,r/min离心5min,准确吸取5mL上清液加入到10mL刻度离心管中,80℃水浴中氮吹蒸发近干,准确加入1.00mL丙酮,涡旋0.5min,用微孔滤膜过滤,待测。
5.1.３ 谷物
称取10g(精确到0.01g)试样于mL具塞锥形瓶中,加入20mL水浸润30min,加入50mL乙腈,在振荡器上以转度为r/min振荡30min,提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静置30min。
准确吸取10mL上清液于mL烧杯中,80℃水浴中氮吹蒸发近干,加入2mL丙酮溶解残余物,盖上铝箔,备用。
将上述溶液完全转移至10.0mL刻度试管中,再用5mL丙酮分3次冲洗烧杯,收集淋洗液于刻度试管中,50℃水浴氮吹蒸发近干,准确加入2.00mL丙酮,涡旋0.5min,用微孔滤膜过滤,待测。
5.1.４ 茶叶和调味料
称取5g(精确到0.01g)试样于mL烧杯中,加入20mL水浸润30min,加入50mL乙腈,用高速匀浆机10r/min高速匀浆2min,提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静置30min。
准确吸取10mL上清液于mL烧杯中,80℃水浴中氮吹蒸发近干,加入2mL乙腈-甲苯溶液(3＋1,体积比)溶解残余物,待净化。
将固相萃取柱用5mL乙腈-甲苯溶液预淋洗。当液面到达柱筛板顶部时,立即加入上述待净化溶液,用mL茄型瓶收集洗脱液,用2mL乙腈-甲苯溶液涮洗烧杯后过柱,并重复一次.再用15mL乙腈-甲苯溶液洗脱柱子,收集的洗脱液40℃水浴中旋转蒸发近干,用5mL丙酮冲洗茄型瓶并转移到10mL离心管中,50℃水浴中氮吹蒸发近干,准确加入1.00mL丙酮,涡旋混匀,用微孔滤膜过滤,待测。
5.1.５ 植物油
称取3g(精确至0.01g)试样于50mL塑料离心管中,加入5mL水、15mL乙腈,并加入6g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠及1颗陶瓷均质子,剧烈振荡1min,r/min离心5min。
准确吸取8mL上清液到内有mg无水硫酸镁、mgPSA、０mgC18的15mL离心管中,涡旋0.5min,r/min离心5min,准确吸取5mL上清液放入10mL刻度离心管中,80℃水浴中氮吹蒸发近干,准确加入1.00mL丙酮,涡旋0.5min,用微孔滤膜过滤,待测。
5.２ 测定
5.2.１ 仪器参考条件
a)色谱柱:
A柱:50％聚苯基甲基硅氧烷石英毛细管柱,30m×0.53mm(内径)×1.0μm,或相当者;
B柱:％聚苯基甲基硅氧烷石英毛细管柱,30m×0.53mm(内径)×1.5μm,或相当者;
b)色谱柱温度:℃保持2min,然后以8℃/min程序升温至℃,再以5℃/min升温至℃,保持15min;
c)载气:氮气,纯度≥99.％,流速为8.4mL/min;
d)进样口温度:℃;
e)检测器温度:℃;
f)进样量:1μL;
g)进样方式:不分流进样;
h)燃气:氢气,纯度≥99.％,流速为80mL/min;
助燃气:空气,流速为mL/min.
5.2.２ 标准曲线
将混合标准中间溶液用丙酮稀释成质量浓度为0.mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L和1mg/L的系列标准溶液,参考色谱条件测定.以农药质量浓度为横坐标、色谱的峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线.
5.2.３ 定性及定量
5.2.3.１ 定性测定
以目标农药的保留时间定性.被测试样中目标农药双柱上色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较,相差应在±0.05min之内。
5.2.3.2 定量测定：以外标法定量。
5.3 试样溶液的测定
将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱仪中,保留时间定性,测得目标农药色谱峰面积,根据式(１),得到各农药组分含量.待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内,超过线性范围,时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。
六、结果计算
试样中被测农药残留量以质量分数ω计,单位以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(１)计算.
计算结果应扣除空白值,计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,保留2位有效数字.当结果超过1mg/kg时,保留3位有效数字。
七、色谱图
色谱图见图1~图6,质量浓度均为0.1mg/L标准溶液。
图１ 第Ⅰ组农药标准溶液1、敌敌畏;2、乙酰甲胺磷;3、虫线磷;4、甲基异内吸磷;5、百治磷6、乙拌磷;7、乐果;8、甲基对硫磷;9、毒死蜱;10、嘧啶磷;11、倍硫磷;12、灭蚜磷;13、丙虫磷;14、抑草磷;15、灭菌磷;16、硫丙磷;17、三唑磷;18、莎稗磷;19、亚胺硫磷。
图２ 第Ⅱ组农药标准溶液20、灭线磷;21、甲拌磷;22、氧乐果;23、二嗪磷;24、地虫硫磷;25、异稻瘟净;26、甲基毒死蜱;27、对氧磷;28、杀螟硫磷;29、溴硫磷;30、乙基溴硫磷;31、巴毒磷;32、丙溴磷;6-2、乙拌磷砜;33、乙硫磷;34、溴苯磷;35、吡菌磷。
图３ 第Ⅲ组农药标准溶液36、甲胺磷;37、治螟磷;38、特丁硫磷;39、久效磷;40、除线磷;41、皮蝇磷;42、甲基嘧啶硫磷;43、对硫磷;44、异柳磷;45、脱叶磷;46、杀扑磷;47、虫螨磷;48、伐灭磷;49、哌草磷;50、伏杀硫磷;51、益棉磷。
图４ 第Ⅳ组农药标准溶液52、速灭磷;53、胺丙畏;54、八甲磷;55、磷胺;56、地毒磷;57、马拉硫磷;58、水胺硫磷;59、喹硫磷;60、丙硫磷;61、杀虫畏;62、苯线磷;63、甲基硫环磷;64、三硫磷;65、苯硫磷;62-1、苯线磷亚砜；21-1、甲拌磷亚砜。
图５ 第Ⅴ组农药标准溶液6-1、乙拌磷亚砜;66、内吸磷;67、乙嘧硫磷;68、氯唑磷;69、甲基立枯磷;70、甲基异柳磷;71、噻唑磷;72、溴苯烯磷;73、蚜灭磷;74、丰索磷;75、甲基吡啶磷;76、哒嗪硫磷;77、保棉磷;78、蝇毒磷；11-2、倍硫磷砜;38-1、特丁硫磷砜。
图６ 第Ⅵ组农药标准溶液79、吡唑硫磷;80、甲基内吸磷;81、硫线磷;82、丁基嘧啶磷;83、敌恶磷;84、甲基对氧磷;85、安硫磷;86、稻丰散;87、碘硫磷;88、恶唑磷;89、硫环磷;90、敌瘟磷;11-1、倍硫磷亚砜;62-2、苯线磷砜；44-1、氧异柳磷;21-1、甲拌磷砜。
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