高效液相色谱仪测定葡萄酒中8种生物胺的含

本文使用丹黄酰氯对目标生物胺进行柱前衍生，采用C18色谱柱(4.6xmm，5um)，以乙腈和水作为流动相，进行梯度洗脱，流速为0.6mL／min，采用紫外检测器，柱温为30℃，检测波长nm，对8种生物胺进行分离分析。

1、试剂和仪器

乙腈：色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水为自制超纯水；

组胺、酪胺、尸胺、乙胺、苯乙胺、精胺、亚精胺和甲胺，纯度98％以上；

丹磺酰氯。

高效液相色谱仪：配紫外检测器；

色谱工作站；

十万分之一分析天平；

pH计；

氮吹仪；

磁量进样枪；

高速离心机；

自动双重纯水蒸馏器。

2、色谱条件

C18色谱柱：4.6xmm，5um；

保护柱：C18，4.0mmx3.0mm，

紫外检测波长：nm，

柱温：30℃，

进样量：20uL，以峰面积外标法定量。

流动相A：乙腈，流动相B：纯水；梯度洗脱；

流速：0.6mL／min。

洗脱程序：0min-6min，A为30％--60％；

6min-10min，A为60％～80％；

10min-15min，A为80％-90％；

15min-20min，A为90％30％。

3、生物胺标准溶液的配制

分别称取组胺、酪胺、尸胺、乙胺、苯乙胺、精胺、亚精胺、甲胺10.0mg-18.0mg，用0.1mol／LHCl溶液溶解并转移到10mL容量瓶中，用0.1mol／LHCI溶液定容，作为标准贮备液，30℃保存备用。使用前，根据实验需要将此标准贮备液用0．1mol／LHCI溶液稀释至适宜含量，以配制标准工作液和混合标准工作液，进高效液相色谱仪分析。

4、样品前处理和衍生

取葡萄酒样1.5mL，向其中加入NaCl至饱和，然后用NaHCO，调节pH值为8.5，再加入正丁醇：氯仿(1：1)的萃取液进行萃取，漩涡振动后离心。取出上层有机梧，再用等体积的萃取液提取2次，合并萃取液，再使用氮气吹干。用0.1mol／LHCI1.5ml溶解残留物，待衍生。

取上述1.5mL样品提取液，加入lmg/ml丹黄酰氯衍生剂溶液(溶剂为丙酮)1.5mL，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值为8.4，然后混合振荡。置40℃避光反应60min，反应完后，取出并加uL氨水来中断反应，混合振荡。衍生后加入3mL乙酸乙酯溶液静置萃取，待分层后取上层有机相，再进行反复萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，40℃水浴条件下氮气吹干。加lmL乙腈溶解残留物，振荡混合，经0.45um微孔滤膜，滤液直接进高效液相色谱仪测定。